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022-66387942抗體保存的是否得當(dāng),直接決定了抗體的活性和使用效果,那么我們該如何正確保存抗體呢?讓我們一起來看看吧!
一、保存溫度和條件
很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小,同時可避免多次在一個管內(nèi)取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體,融解一次后剩余抗體應(yīng)保存于4°C。收到抗體后,應(yīng)10,000 x g 離心20秒,使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液全部離心至管底,用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于10μl;分裝量越少,由于蒸發(fā)和吸附于管內(nèi)壁而引起的損失會越大。
除了腹水液含蛋白酶應(yīng)立即凍存外,大多數(shù)抗體接收后可在4°C保存一至兩周,隨后可凍存以長期保存。同樣,應(yīng)按照說明書推薦的條件進行保存。
二、特殊情況
1、酶聯(lián)抗體,不應(yīng)凍存,4°C可保證穩(wěn)定。凍融會降低酶的活性,同時影響抗體的吸附能力。
2、偶聯(lián)標(biāo)記的抗體,無論是標(biāo)記的熒光染料、酶還是生物素,都應(yīng)保存于深色的管內(nèi)并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會減弱偶聯(lián)標(biāo)記物的活性。熒光標(biāo)記物尤其容易受到光漂白作用,整個實驗過程中均應(yīng)避光。
3、免疫球蛋白G3同種型抗體凍融后易形成聚合物,因此應(yīng)一直保存于4°C。
4、用疊氮hua鈉防止污染
為防止微生物污染,在抗體溶液中應(yīng)加入疊氮hua鈉,終濃度為0.02%(質(zhì)量百分比)。
5、什么時候不能用疊氮hua鈉
如果用抗體標(biāo)記活細胞,或用于體內(nèi)實驗,確保所用制劑中不含疊氮hua鈉。這種抗生素對大多數(shù)有機體都有毒性:會阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)的信號。
疊氮hua鈉會干擾胺基的偶聯(lián)標(biāo)記,應(yīng)在進行標(biāo)記之前將其除去。標(biāo)記后抗體可保存于疊氮hua鈉,也可用不含胺基的硫柳汞替代。疊氮hua鈉可用透析或凝膠過濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白 G的分子量是150,000 kDa(免疫球蛋白M的分子量是600,000 kDa),疊氮hua鈉的分子量是65道爾頓。使用14,000 kDa的微量透析裝置,隨著疊氮hua鈉的擴散,抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于4°C攪拌透析裝置6小時 , 每毫升抗體溶液要用至少1升的磷酸鹽緩沖液。更換2次lin酸鹽緩沖液,每次均攪拌至少6小時。如果可以的話,所有材料均要求無菌,所有溶液都應(yīng)無菌配制。
三、凍存 / 復(fù)蘇的損失
反復(fù)凍融可使抗體變性,使其形成聚合物而降低了抗體結(jié)合能力。
大多數(shù)抗體在-20°C保存就足夠了,沒有必要置于-80°C保存。千萬不要使用無霜的冰箱。反復(fù)凍融能減少霜的形成,但這正是應(yīng)該避免的。同理,抗體應(yīng)該放置于冰箱中溫度變化最小的部位,如應(yīng)放置于冰箱格里,而不應(yīng)放置于冰箱門上。
稀釋至工作濃度的抗體最好不要在4°C保存超過一天時間。通常蛋白質(zhì)在較高濃度保存時不易發(fā)生降解,理想濃度為1mg/ml或更高,因為抗體溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。加入的蛋白可吸附于管壁從而使抗體的損失減到最小。對用于聚合的抗體,不應(yīng)加入蛋白穩(wěn)定劑,因為其可能會與抗體競爭而降低抗體的聚合活性。
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